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    色譜柱選擇指南

    2019/5/14 18:45:31 1994

    氣相色譜柱(以下簡稱色譜柱或柱子),是氣相色譜(質譜)分析設備的心臟部件。選擇一根適用的色譜柱不僅僅 能夠對樣品進行有效的分離,更是色譜分析結果準確性和可靠性的保證。如果使用了不合適的色譜柱產品,得到的是不 完全的分離結果和不準確的定性定量結果。

     大約有10,000種化合物可以用約400種不同種類氣相色譜柱進行分離。對于這樣數量繁多的應用項目,色譜柱生產制 造廠家需要幫助用戶選擇到實際需要的產品。GS-TEK通過多年的色譜柱制造和應用經驗,可以快速地幫助您選擇到合適 的色譜柱產品。

      色譜柱特性

     一根色譜柱的規格描述包括其固定相的種類和內外部尺寸(柱內徑、長度和膜厚等)。不同規格指標的色譜柱,對樣 品的分離結果影響也不盡相同,如樣品分離的洗脫順序、保留時間、分辨率和峰形/峰高等。另外,在實際分析應用中, 色譜柱的性能指標,如惰性、塔板數和柱流失率等,同樣會嚴重影響到樣品的分離結果。不過,無論這些指標是直接地 或間接地影響分析結果的準確性和可靠性,在它們之中,固定相種類還是最重要的和最有效地的影響因素。

     固定相

     在選擇色譜柱時,首先要分析樣品的類型以確定使用哪種固定的產品。固定相通常分為三大類:非極性、中等極性和 極性?;诠潭ㄏ嗷瘜W組成可以分為硅氧烷型(非極性和中等極性)和聚乙二醇型(PEG或極性)。而根據機理又可分 為WCOT(氣-液分配色譜)和PLOT(氣-固吸附色譜)。下表列舉了常見的固定相種類。

     

    基于相似相容原則,通常來說,非極性色譜柱保留非極性化合物,極性色譜柱保留極性化合物。但是,沒有活用這

    個原則就不可能選擇到適用的色譜柱產品。多數樣品的組成都很復雜,其中即有非極性化合物,也有極性化合物,如汽 油中就混合著變性乙醇。

     在過去的幾十年中,所有的GC應用中,非極性色譜柱的使用率高于中等極性柱和極性柱。一般來說,非極性柱,如 GsBP-5MS柱,可以適用超過50%的分析應用中。而極性或非極性柱,如PEG柱,大概適用于25%的分析應用中。像現 今使用非極性色譜柱對溶劑和藥物中揮發性化合物進行分析就成為了一種趨勢。

     通常,我們會先選擇非極性色譜柱,而極性色譜柱會選擇用于較不復雜的樣品(較少種類化合物組成的樣品)。在 進行分離確認時,對同一樣品,一般會同時使用極性和非極性色譜柱。

     下表列出了對于不同樣品而推薦使用的色譜柱類型。

    在選擇適用的固定相時,分析設備和分析條件也是需要參考的指標。如檢測器的種類、載氣和進樣體積等。如果我們
    不考慮對樣品選擇性和檢測靈敏度的影響,那么就使用檢測器低響應固定相的色譜柱。比如說含氰基的固定相,像
    1301、1701、624等這樣的色譜柱就盡量不要與GC-NPD(氮磷檢測器)連用。對于超低流失的固定相,如-1MS或-
    5MS的柱子,因為它們可以保證最低的檢測基線和噪聲水平,所以在做低或超低檢測限樣品時,超低流失色譜柱是最好 的選擇。如果我們使用的載氣不純,或是設備中有氣體泄漏,這樣的問題無法解決或無法及時解決,為了不使柱固定相
    過早的被破壞,高溫適用固定相的色譜柱是相對好的選擇。另外,除非方法需要,我們盡量選擇鍵合固定相的色譜柱, 對比非鍵合相和非交聯相色譜柱,交聯鍵合固定相色譜柱對樣品種類和進樣體積的耐受力更強,柱性能下降的最慢。


    當遇到復雜的樣品,其分離和色譜峰鑒定也都很復雜,一般我們會選擇非極性色譜柱,因為相對極性色譜柱來說,
    樣品在非極性色譜柱上洗脫順序的機理和判定會簡單許多。


    在做應用方法確證時,我們會同時使用非極性柱和極性柱,對色譜峰鑒定或分離結果進行確證。通常我們做農藥分 析方法確證時,選用-5MS和-1701/-35色譜魔王;做殘留溶劑分析方法確證時,選用-5MS和-624/-VMS色譜柱;做醇 類或FAME分析方法確證時,選用PEG和含氰基固定相色譜柱;做汽油中氧化物分析方法確證時,選用-1和PEG色譜柱。


    色譜柱內徑


    標準色譜柱內徑(ID)尺寸為0.2mm、0.25mm、0.32mm和0.53mm。少數方法會使用到0.1mm和0.8mm內徑的 柱子。0.25mm是最常用的色譜柱內徑尺寸,而0.53mm的色譜柱通常是替代填充柱用于大體積進樣的方法應用。


    色譜柱內徑的大小對分離效果的影響是明顯卻矛盾的。越細的色譜柱,其塔板數就越高,柱效就越高,但同時樣品 承載容量越小,進樣體積就需要減少。當樣品量過載時,色譜柱塔板數就會明顯下降。所以對于色譜柱內徑尺寸,我們 通常選用比較折衷的方案??傮w來講,對應方法應用沒有最佳色譜柱內徑尺寸的說法。


    每行每業對于色譜柱內徑一般都有自己的方法參考或內部標準。經驗的方法是,對于樣品中痕量級雜質的分析,或 是使用頂空進樣(Head Space,HS)的應用方法,我們多選用0.53mm內徑的色譜柱。如果需要改善分離效果,或是臨 界分離的需求,我們多選用小尺寸(0.25mm或0.20mm)的色譜柱。而我們常常會見實驗室用到0.32mm內徑的色譜 柱,這是因為0.32mm內徑色譜柱可以相對兼顧到進樣量和柱效。


    現今0.25mm內徑色譜柱多見于分析方法中,至少在50%的文獻中都使用了0.25mm內徑的色譜柱產品。這是因為在 環境、食品、農業、制藥、工業等諸多行業中,GC-MS的使用率大大增加,而0.25mm內徑的色譜柱,特別是MS超低流 失色譜柱產品在GC-MS應用中對柱效和進樣量的兼顧性最好。


    0.10mm和0.20mm內徑的色譜柱產品多用于快速分析方法中。此外,柱子的惰性、柱效和柱流失等同樣也能改進 分離分析的結果。比較而言,0.32mm和0.53mm內徑的色譜柱,其惰性好于0.20mm和0.25mm內徑的色譜柱。所以對 色譜柱惰性要求較高時,大口徑的色譜柱是較好的選擇。如果分析設備對進樣口壓力控制有限時,大口徑色譜柱是最佳 的選擇。如果我們使用的載氣純度不高,或是設備分析條件難以設置或保持,選擇較大口徑的色譜柱(0.32mm或 0.53mm)可以得到更長的柱壽命。如果對于柱流失有要求,小口徑色譜柱和較薄膜厚的色譜柱產品則是最佳的選擇。


    色譜柱長度


    色譜柱的長短直接影響到保留時間(分析時間)和分離效率(塔板數加倍)。實驗室用色譜柱長多為5m、7.5m、 10m、12.5m、15m、25m、30m、50m、60m、75m、100m和105m等。最常見的色譜柱長度是30m。


    對于快速分析應用來說,除了選擇適當的柱內徑,柱子長度也短許多(例如5~15m x 0.25mm)。只有這樣,才有 可能在最短的時間內,得到最佳的分離效果和分析結果。


    如果方法需要改進提高分辨率,較長的色譜柱,如60m或100m,是理想的選擇。分辨率與柱長的平方根成正比。 需要注意的是,像一根60m長的色譜柱相對于30m的柱子,其分辨率提高近40%,但分析時間會成倍增長。


    在揮發物的分析應用中,為了改善分離效果,常使用較長的柱型,如50m、60m和100m等。在氣態樣品和精細烴 分析應用中,較長色譜柱的使用較為普遍。


    更長的色譜柱會影響柱惰性、柱流失和柱效等多個方面。同時,需要更高的載氣壓力或更換載氣的種類(如把氮氣
    更換成氫氣/氦氣)。


    色譜柱膜厚


    商品化色譜柱的膜厚規格一般是0.1um、0.15um、0.25um、0.5um、1.0um、1.5um、3um、5um等等。歷史文 獻中我們還可以看到諸如0.33um、0.88um和2.65um等這樣特殊的膜厚尺寸?,F今實驗室中最常見的色譜柱膜厚為 0.25um、0.5um和1um。


    膜厚規格主要影響兩個指標,保留時間和樣品負載能力。另外,色譜柱適用溫度范圍、分析時間和分析結果的準確 性和可靠性等也與膜厚有關。例如一根內徑為0.25mm,膜厚為0.1um的色譜柱可以達成快速分離的效果,甚至可以改進 分離分辨率,降低色譜柱的流失,適用于更寬泛的溫度范圍等。膜厚的規格會影響到色譜柱惰性,而這個指標在有些應 用中是非常重要的。同時膜厚規格對色譜柱樣品承載能力的影響也是很明顯的。


    0.25um x 0.25mm、0.5um x 0.32mm、1um或1.5um x 0.53mm規格的色譜柱在分離效果、保留性能、分辨率、 惰性和柱流失等指標方面較為均衡,常規使用較多。


    色譜柱膜厚與柱內徑的關系體現在相比(β)上。如果有兩根相同相比和固定相的色譜柱,內徑不同,在相同的溫度 條件下,兩根色譜柱的分離效果和保留性能相同或相似。舉個例子,在GsBP-5MS 0.25 x 30m x 0.25um(β=250)和 0.53mm x 30m x 0.5um(β-265)上進行同一樣品的分析,分離結果與保留時間相似。


    色譜柱的定制

    如果您沒有找到合適于您的商業化色譜柱產品,我們可以為您定制色譜柱。除了固定相種類,我們可以根據您的設 計要求或我們討論的結果進行定制,包括柱內徑、柱長和膜厚等。另外,我們也提供連接不同的色譜柱或加裝預柱等服 務。有意向請與我們聯系。


    樣品特性


    選擇什么樣的色譜柱,自然是依據分析樣品的種類和性質。一個樣品的特性有多種描述方式,下表中列出了一些常用 的選擇指導。

    小結

    ● 盡量從方法、規則、實驗結果等中搜集相關的信息,這些可以從公開的文獻和色譜柱生產制造廠商處獲得。
    ● 了解您的樣品和應用需求。
    ● 可以先使用常規的色譜柱進行分析,如非極性30m x 0.25mm標準尺寸。
    ● 使用最常規的色譜柱可能完成大多數常規的分離工作,無論是完全或是部分分離。
    ● 如果遇到問題,針對問題內容可以重復實驗,或與色譜柱廠商進行溝通以解決問題,這樣即可節省時間,又可以節 省資金。
    ● 與他人分享您的經驗和知識,惠已惠人。
    ● 優化分離包括柱子的選擇不是一個簡單的過程,不同品牌不同批次的產品都有可能有不一樣的分離效果。所以,請 記住,沒有完美的色譜柱。

     

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